डच शोधकर्ताओं ने एक प्रायोगिक परीक्षण में CRISPR और बायोल्यूमिनसेंस को संयोजित कियासंक्रामक रोग

नीदरलैंड के शोधकर्ताओं के अनुसार, एक नव विकसित रात्रि प्रोटीन वायरल रोगों के निदान को तेज और सरल बना सकता है।
एसीएस प्रकाशन में बुधवार को प्रकाशित उनका अध्ययन, चमकते चमकीले नीले या हरे प्रोटीन का उपयोग करके वायरल न्यूक्लिक एसिड और उनकी उपस्थिति का तेजी से विश्लेषण करने के लिए एक संवेदनशील, एक-चरणीय विधि का वर्णन करता है।
उनके न्यूक्लिक एसिड फ़िंगरप्रिंट का पता लगाकर रोगजनकों की पहचान नैदानिक ​​​​निदान, बायोमेडिकल अनुसंधान और खाद्य और पर्यावरण सुरक्षा निगरानी में एक महत्वपूर्ण रणनीति है।व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) परीक्षण अत्यधिक संवेदनशील होते हैं, लेकिन इसके लिए परिष्कृत नमूना तैयार करने या परिणामों की व्याख्या की आवश्यकता होती है, जो उन्हें कुछ स्वास्थ्य देखभाल सेटिंग्स या संसाधन-सीमित सेटिंग्स के लिए अव्यावहारिक बनाता है।
नीदरलैंड का यह समूह विश्वविद्यालयों और अस्पतालों के वैज्ञानिकों के बीच एक तेज़, पोर्टेबल और उपयोग में आसान न्यूक्लिक एसिड डायग्नोस्टिक विधि विकसित करने के लिए सहयोग का परिणाम है जिसे विभिन्न सेटिंग्स में लागू किया जा सकता है।
वे जुगनू की चमक, जुगनू की चमक और जलीय फाइटोप्लांकटन के छोटे तारों से प्रेरित थे, ये सभी बायोलुमिनसेंस नामक घटना से संचालित थे।यह अंधेरे में चमकने वाला प्रभाव लूसिफ़ेरेज़ प्रोटीन से जुड़ी एक रासायनिक प्रतिक्रिया के कारण होता है।वैज्ञानिकों ने ल्यूसिफ़ेरेज़ प्रोटीन को सेंसर में शामिल किया जो लक्ष्य मिलने पर अवलोकन की सुविधा के लिए प्रकाश उत्सर्जित करता है।हालांकि यह इन सेंसरों को प्वाइंट-ऑफ-केयर डिटेक्शन के लिए आदर्श बनाता है, लेकिन वर्तमान में उनमें नैदानिक ​​​​नैदानिक ​​​​परीक्षणों के लिए आवश्यक उच्च संवेदनशीलता का अभाव है।जबकि सीआरआईएसपीआर जीन संपादन विधि यह क्षमता प्रदान कर सकती है, इसमें कमजोर सिग्नल का पता लगाने के लिए कई चरणों और अतिरिक्त विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है जो जटिल, शोर वाले नमूनों में मौजूद हो सकते हैं।
शोधकर्ताओं ने सीआरआईएसपीआर-संबंधित प्रोटीन को बायोलुमिनसेंट सिग्नल के साथ संयोजित करने का एक तरीका खोजा है जिसे एक साधारण डिजिटल कैमरे से पता लगाया जा सकता है।यह सुनिश्चित करने के लिए कि विश्लेषण के लिए पर्याप्त आरएनए या डीएनए नमूना है, शोधकर्ताओं ने रीकॉम्बिनेज़ पोलीमरेज़ एम्प्लीफिकेशन (आरपीए) का प्रदर्शन किया, जो एक सरल तकनीक है जो लगभग 100 डिग्री फ़ारेनहाइट के निरंतर तापमान पर काम करती है।उन्होंने ल्यूमिनसेंट न्यूक्लिक एसिड सेंसर (LUNAS) नामक एक नया प्लेटफ़ॉर्म विकसित किया, जिसमें दो CRISPR/Cas9 प्रोटीन वायरल जीनोम के विभिन्न सन्निहित भागों के लिए विशिष्ट हैं, प्रत्येक के ऊपर एक अद्वितीय ल्यूसिफ़ेरेज़ टुकड़ा जुड़ा हुआ है।
जब जांचकर्ता जिस विशिष्ट वायरल जीनोम की जांच कर रहे हैं वह मौजूद होता है, तो दो CRISPR/Cas9 प्रोटीन लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम से जुड़ जाते हैं;वे निकटता में हो जाते हैं, जिससे अक्षुण्ण ल्यूसिफ़ेरेज़ प्रोटीन को रासायनिक सब्सट्रेट की उपस्थिति में नीली रोशनी बनाने और उत्सर्जित करने की अनुमति मिलती है।.इस प्रक्रिया में उपभोग किए गए सब्सट्रेट का हिसाब लगाने के लिए, शोधकर्ताओं ने एक नियंत्रण प्रतिक्रिया का उपयोग किया जो हरी रोशनी उत्सर्जित करती थी।एक ट्यूब जो हरे से नीले रंग में बदलती है वह सकारात्मक परिणाम का संकेत देती है।
शोधकर्ताओं ने RPA-LUNAS परख विकसित करके अपने प्लेटफ़ॉर्म का परीक्षण किया, जो पता लगाता हैSARS-CoV-2 आरएनएथकाऊ आरएनए अलगाव के बिना, और नासॉफिरिन्जियल स्वाब नमूनों पर इसके नैदानिक ​​प्रदर्शन का प्रदर्शन कियाCOVID-19मरीज़.RPA-LUNAS ने 200 प्रतियों/μL जितनी कम आरएनए वायरल लोड वाले नमूनों में 20 मिनट के भीतर SARS-CoV-2 का सफलतापूर्वक पता लगाया।
शोधकर्ताओं का मानना ​​है कि उनकी परख कई अन्य वायरस का आसानी से और प्रभावी ढंग से पता लगा सकती है।उन्होंने लिखा, "आरपीए-लूनास प्वाइंट-ऑफ-केयर संक्रामक रोग परीक्षण के लिए आकर्षक है।"